Συμβολή της γονοτύπησης στη διερεύνηση περιστατικών ελονοσίας από Plasmodium vivax
Contribution of genotyping analysis for investigation of malaria cases caused by Plasmodium vivax
Λέξεις-κλειδιά
Γονοτύπηση ; Ελονοσία ; Plasmodium vivaxΠερίληψη
Οι επιδημιολογικές μελέτες που διεξάγονται σε ενδημικές και μη περιοχές για ελονοσία ανά τον κόσμο κρίνονται απαραίτητες από άποψη Δημόσιας Υγείας. Απώτερος στόχος παραμένει η διερεύνηση της μετάδοσης της νόσου στον άνθρωπο, μέσω των πέντε διαφορετικών ειδών πλασμωδίων που έχουν περιγραφεί μέχρι σήμερα.
Η παρούσα πτυχιακή εργασία επιχείρησε να διερευνήσει περαιτέρω και να χαρακτηρίσει το γονοτυπικό προφίλ περιστατικών ελονοσίας από P. vivax. Χρησιμοποιήθηκαν συνολικά 22 θετικά δείγματα για αυτό το είδος πλασμωδίου και αξιολογήθηκε η συμβολή της γονοτυπικής ανάλυσης. Τα συγκεκριμένα δείγματα είχαν αποσταλεί στο Κέντρο Αναφοράς Ελονοσίας του Τομέα Παρασιτολογίας, Εντομολογίας και Τροπικών Νοσημάτων της πρώην Εθνικής Σχολής Δημόσιας Υγείας (νυν Τμήμα Πολιτικών Δημόσιας Υγείας, Σχολή Δημόσιας Υγείας, Πανεπιστήμιο Δυτικής Αττικής) και ληφθεί από άτομα που προέρχονται κυρίως από ενδημικές χώρες και κατοικούν στην Πελοπόννησο. Τα δείγματα που μελετήθηκαν αφορούν σε 14 περιπτώσεις για το έτος 2016 και οκτώ περιπτώσεις για το έτος 2015, αντίστοιχα.
Η επίτευξη της γονοτυπικής ανάλυσης των θετικών με P. vivax δειγμάτων πραγματοποιήθηκε στο εργαστήριο με εφαρμογή στοχευμένης μοριακής μεθόδου αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης. Πιο συγκεκριμένα, ακολουθήθηκε μοριακό πρωτόκολλο, η αρχή του οποίου βασίζεται στη μέθοδο της εμφωλεασμένης PCR (Nested PCR), μέσω της οποίας ενισχύεται μία καθορισμένη περιοχή του Msp3a γονιδίου του P. vivax, ένα γονίδιο αντίγονου υψηλής πολυμορφικότητας της επιφανειακής πρωτεΐνης 3α των μεροζωιτών του πλασμωδίου, που χρησιμοποιείται συχνά σε μελέτες γενετικής ποικιλομορφίας των πλασμωδίων. Η προτεινόμενη μεθοδολογία αποτελείται από δύο διαδοχικές αντιδράσεις PCR, με τη χρήση διαφορετικών ζευγών εκκινητών για κάθε αντίδραση (P1-P2 & N1-N2) και αποσκοπεί στην αύξηση της ευαισθησίας του τελικού προϊόντος αντίδρασης.
Τα αποτελέσματα της εργασίας ανέδειξαν τον εντοπισμό τριών διακριτών γονοτύπων του P. vivax στο σύνολο των δειγμάτων που ελέγχθηκαν (A, B, C). Η πλειοψηφία των δειγμάτων κατηγοριοποιήθηκε ως έχοντα τον γονότυπο A. Επιπρόσθετα, αναδείχθηκε η αξία της εφαρμογής γονοτυπικής ανάλυσης στη διερεύνηση περιστατικών ελονοσίας από P. vivax, η οποία πρέπει να επεκτείνεται και στη μελέτη περισσότερων γονιδιακών περιοχών ώστε τα αποτελέσματα να έχουν ουσιαστική συμβολή στην επιδημιολογική συσχέτιση των περιστατικών.
Περίληψη
Epidemiological studies carried out in endemic and non-endemic areas for malaria around the world are considered imperative from a public health point of view. Investigation for transmission of malaria to humans remains the ultimate goal, through the action of the five currently described different species of Plasmodium.
The present study attempted to further investigate and characterize the genotypic profile of malaria P. vivax cases. A total of 22 positive samples were used and the contribution of genotypic analysis was evaluated. These samples were sent to the Malaria Reference Center of the Department of Parasitology, Entomology and Tropical Diseases of the former National School of Public Health (currently Department of Public Health Policies, School of Public Health, University of Western Attica), taken from people descending from endemic countries who reside in the Peloponnese region. The samples examinated were related to 14 cases for the year 2016 and eight cases for the year 2015, respectively.
Genotypic analysis of positive P. vivax samples was carried out in the laboratory using a targeted polymerase chain reaction molecular protocol. More specifically, a nested PCR approach was implemented, according to which a defined area of the Msp3a gene of P. vivax was amplified. The latter constitutes a highly polymorphic antigen-encoding gene of the surface protein 3a of plasmodium merozoites, often used in studies of genetic diversity of plasmodium isolates. The proposed methodology consists of two successive PCR reactions, using different pairs of primers for each reaction (P1-P2 & N1-N2) and aims to increase the sensitivity of the final reaction product.
The extracted results showed the identification of three distinct genotypes of P. vivax in all tested samples (A, B, C). The majority of samples were categorized as having genotype A. Furthermore, implementation of genotypic analysis in the investigation of malaria cases from P. vivax was highlighted, a notion which should be extended towards studying additional genetic regions and contributing substantially in terms of epidemiological correlation of clinical cases.
Αριθμός σελίδων
112Σχολή
Σχολή Επιστημών Υγείας & ΠρόνοιαςΑκαδημαϊκό Τμήμα
Τμήμα Βιοϊατρικών ΕπιστημώνΓλώσσα
ΕλληνικάΣυλλογή
Εκτός από όπου επισημαίνεται κάτι διαφορετικό, το τεκμήριο διανέμεται με την ακόλουθη άδεια:
Αναφορά Δημιουργού - Μη Εμπορική Χρήση - Παρόμοια Διανομή 4.0 Διεθνές
Αναφορά Δημιουργού - Μη Εμπορική Χρήση - Παρόμοια Διανομή 4.0 Διεθνές