Η παρουσία των CD34+ κυττάρων σε παράγωγα του αίματος

Τσολάκης, Λάμπρος

The presence of CD34+ cells in blood products

Μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία

Author

Τσολάκης, Λάμπρος

Date

2024-10-02

Advisor

Κριεμπάρδης, Αναστάσιος

Διπλωματική Μεταπτυχιακή Εργασία (2.342Mb)

Keywords

Ερυθροποίηση ; Μετάγγιση ; CD34+ ; Βλαστοκύτταρα ; Γλυκοπρωτεΐνη.

Abstract

Εισαγωγή: Η μετάγγιση του αίματος και των παραγώγων του, αποτελεί μία υποστηρικτική θεραπεία σε ανθρώπους που πάσχουν από ασθένειες ή βρίσκονται σε κλινική κατάσταση, ώστε η παροχή του να είναι απαραίτητη. Τα χρόνια αιματολογικά νοσήματα, η οξεία απώλεια αίματος και τα τραύματα, είναι κλινικές καταστάσεις που απαιτούν συνεχή ανάγκη για μετάγγιση με ερυθρά αιμοσφαίρια. Ωστόσο, είναι αρκετά δαπανηρές, για τις υπηρεσίες υγειονομικής περίθαλψης και όχι χωρίς κινδύνους. Για να είναι, μία ουσιαστική υποστηρικτική θεραπεία, πρέπει να είναι και ασφαλής. Η ασφάλειά της έχει αυξηθεί τα τελευταία χρόνια, ωστόσο παρουσιάζει αρκετούς κινδύνους ως διαδικασία, που πρέπει να μπορούν να αντιμετωπίσουν οι κλινικοί γιατροί. Οι ανεπιθύμητες ενέργειες, οι παθογόνες λοιμώξεις και η εμφάνιση συμβαμάτων αλλοανοσοποίησης, είναι σημαντικοί παράγοντες στους οποίους κινδυνεύουν να εκτεθούν οι ασθενείς που λαμβάνουν μετάγγιση αίματος ή παραγώγων του. Σκοπός: Να αναζητηθεί η παρουσία των CD34+ κυττάρων καθώς και ο ποσοτικός τους προσδιορισμός, σε ασκούς παράπλευρων προϊόντων αίματος. Η ανίχνευση της παρουσίας και η ποσοτικοποίηση των CD34+ προγονικών, αιμοποιητικών κυττάρων, πραγματοποιείται με την κυτταρομετρία ροής. Σκοπός αυτής της ερευνητικής διπλωματικής εργασίας, είναι να βοηθήσει στο ελάχιστο, μελέτες και έρευνες, που γίνονται τα τελευταία χρόνια, ώστε να επιτευχθεί η παραγωγή μεταγγιζόμενων ερυθρών αιμοσφαιρίων στο εργαστήριο, με τελικό στόχο να αντιμετωπιστούν στο μέλλον, προβλήματα στην επάρκεια του αίματος, στην ασφάλεια και την αποτελεσματικότητα στην μετάγγισής του. Μέθοδος: Επεξεργασία ποσότητας αίματος από συνοδούς ασκούς, σε σωληνάρια τύπου FALCON. Μετά από φυγοκένριση, η στοιβάδα των κυττάρων που δημιουργείται, συλλέγεται και με την προσθήκη Lysing Solution επιτυγχάνεται η λύση των πυρήνων. Το ίζημα πλένεται με PBS και γίνεται προσθήκη αντισώματος CD34. Το τελευταίο στάδιο της μεθόδου, είναι η κυτταρομετρική ανάλυση εντός 48 ωρών. Αποτελέσματα: Επεξεργάστηκαν 86 δείγματα από ασκούς παράπλευρων προϊόντων, πολλαπλών δοτών. Μετά την επεξεργασία τους, εντός 48 ωρών, αναλύθηκαν με viii κυτταρομετρία ροής. Καταγράψαμε την παρουσία των CD34+ κυττάρων και τον ποσοτικό τους προσδιορισμό. Συμπεράσματα: Συμπερασματικά, με την προσπάθεια να αναζητηθεί, καθώς και να ποσοτικοποιηθεί η παρουσία των CD34+ κυττάρων, σε ασκούς από παράπλευρα προϊόντα αίματος, πολλαπλών δοτών, μέσω της κυτταρομετρικής ανάλυσης ροής, ανιχνεύθηκαν και μετρήθηκαν CD34+ κύτταρα, σε ποσοστό αναλογικά με τα λευκοκύτταρα.

Abstract

Introduction: The transfusion of blood and its derivatives is a supportive treatment for people who suffer from diseases or are in a clinical condition, so that its provision is necessary. Chronic hematological diseases, acute blood loss and trauma are clinical conditions that require a continuous need for red blood cell transfusion. However, they are quite expensive for healthcare services and not without risks. To be an essential supportive treatment, it must also be safe. Its safety has increased in recent years, but it presents several risks as a procedure, which clinicians must be able to address. Adverse effects, pathogenic infections, and the occurrence of alloimmunization events are important risk factors for patients receiving transfusion of blood or its derivatives. Purpose: To look for the presence of CD34+ cells as well as their quantification, in bags of collateral blood products. Detection of the presence and quantification of CD34+ progenitor, hematopoietic cells is performed by flow cytometric analysis. The purpose of this research thesis is to help at least the studies and research that have been done in recent years, in order to achieve the production of transfused red blood cells in the laboratory, with the ultimate goal of addressing in the future, problems in blood sufficiency, safety and its transfusion efficiency. Method: Treatment of a quantity of blood from companion bags, in FALCON tubes. After centrifugation, the layer of cells that is created is collected and with the addition of Lysing Solution the nuclei are lysed. The pellet is washed with PBS and CD34 antibody is added. The last stage of the method is the cytometric analysis within 48 hours. Results: 86 samples from multi-donor by-product pouches were processed. After their treatment, within 48 hours, they were analyzed by flow cytometry. With the obtained results, we recorded the presence of CD34+ cells and their quantification. Discussion: In conclusion, by attempting to search for, as well as quantify, the presence of CD34+ cells, in bags from collateral blood products, of multiple donors, through flow cytometric analysis, CD34+ cells were detected and measured, in proportion to leukocytes.