Διερεύνηση του υποκυτταρικού εντοπισμού ιικών πρωτεϊνών και dsRNA που παράγονται κατόπιν μόλυνσης με ανασυνδυασμένους μπακουλοϊούς

Πρίφτι, Ιζαμπέλα

dc.contributor.advisor	Kolliopoulou, Anna
dc.contributor.author	Πρίφτι, Ιζαμπέλα
dc.date.accessioned	2021-10-11T11:05:27Z
dc.date.available	2021-10-11T11:05:27Z
dc.date.issued	2021-10-04
dc.identifier.uri	https://polynoe.lib.uniwa.gr/xmlui/handle/11400/1306
dc.identifier.uri	http://dx.doi.org/10.26265/polynoe-1157
dc.description.abstract	Η διαχείριση επιβλαβών εντόμων μέσω της RNA παρεμβολής (RNAi) συνιστά μια μεθοδολογία με πολλές προοπτικές, που θεωρείται ακίνδυνη για το περιβάλλον και τον άνθρωπο. Ενδιαφέρουσα προσέγγιση είναι η παράδοση εξειδικευμένων μορίων dsRNA σε έντομα-στόχους, εγκαψιδιωμένων μέσα σε ιόμορφα σωμάτια (VLPs). Η RNA παρεμβολή, κατευθυνόμενη από μικρά παρεμβαλλόμενα RNAs (siRNAs), αποτελεί ισχυρό αντιιικό μηχανισμό κατά RNA και DNA ιών σε πολλούς ευκαρυωτικούς οργανισμούς. Ειδικότερα, ο μηχανισμός αυτός ξεκινά με την αναγνώριση του dsRNA ιικής προέλευσης στο κυτταρόπλασμα από το ένζυμο τύπου RNase-III Dicer-2 (Dcr2), μετατρέποντάς το σε siRNAs. Προκειμένου λοιπόν να καταστεί εφικτή η παραγωγή των dsRNA σε υψηλά επίπεδα, χρησιμοποιήθηκε ο ανασυνδυασμένος πολλαπλός πυρηνικός πολυεδρικός ιός AcMNPV, ο οποίος εκφράζει μια φθορίζουσα ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη του ιού Flock House που δρα ως παρεμποδιστής του RNAi (B2-GFP) και μια RNA φουρκέτα που στοχεύει στο γονίδιο της λουσιφεράσης (dsLuc). Η στρατηγική αποσκοπεί στην πρόσδεση πολλών μορίων B2 στα μόρια dsLuc που θα εκφράζονται, με στόχο την αποφυγή του κατακερματισμού τους από τη Dicer-2. Η παρούσα μελέτη επικεντρώθηκε στη διερεύνηση της υποκυτταρικής κατανομής της B2, άρα και της φουρκέτας dsLuc, παρουσία φθοριζουσών ανασυνδυασμένων ιικών πρωτεϊνών (ODV, IE1, GP64, Ac93) για την καλύτερη αξιολόγηση της αύξησης των dsRNA. Συγχρόνως, πραγματοποιήθηκαν έλεγχοι σε γονιδιακό και πρωτεϊνικό επίπεδο για την έκφραση του ιού. Επιπλέον, εκτιμήθηκαν τα επίπεδα παραγωγής των μορίων dsRNA σε μολυσμένα κύτταρα συγκριτικά με μη μολυσμένα. Ύστερα από σύγκριση με την υπάρχουσα αρθρογραφία, δείχθηκε ο πανομοιότυπος υποκυτταρικός εντοπισμός των ιικών πρωτεϊνών, ενώ η παρουσία της πρωτεΐνης Β2 φαίνεται να μην μεταβάλλει το βασικό μοτίβο του εντοπισμού των ιικών πρωτεϊνών κατά τη μόλυνση. Τέλος, η εντόπιση της πρωτεΐνης Β2-GFP κυρίως στον πυρήνα και η αύξηση των ολικών μορίων dsRNA στα μολυσμένα κύτταρα με τον ιό AcMNPV-dsLuc/B2-GFP, δείχνουν την πιθανή αύξηση των επιθυμητών dsRNA.	el
dc.format.extent	122	el
dc.language.iso	el	el
dc.publisher	Πανεπιστήμιο Δυτικής Αττικής	el
dc.rights	Αναφορά Δημιουργού - Μη Εμπορική Χρήση - Παρόμοια Διανομή 4.0 Διεθνές	*
dc.rights	Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Διεθνές	*
dc.rights.uri	http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/	*
dc.subject	Λεπιδόπτερα	el
dc.subject	siRNA	el
dc.subject	AcMNPV	el
dc.subject	RNA παρεμβολή	el
dc.subject	Δίκλωνο RNA	el
dc.subject	Ιικός καταστολέας του RNAi	el
dc.subject	Β2 πρωτεΐνη	el
dc.subject	Μπακουλοϊός	el
dc.subject	Σύστημα φορέα έκφρασης μπακουλοϊού	el
dc.title	Διερεύνηση του υποκυτταρικού εντοπισμού ιικών πρωτεϊνών και dsRNA που παράγονται κατόπιν μόλυνσης με ανασυνδυασμένους μπακουλοϊούς	el
dc.title.alternative	Study on the subcellular localization of viral proteins and dsRNA produced after infection with recombinant baculoviruses	el
dc.type	Πτυχιακή εργασία	el
dc.contributor.committee	Beloukas, Apostolos
dc.contributor.committee	Παππά, Όλγα
dc.contributor.faculty	Σχολή Επιστημών Υγείας & Πρόνοιας	el
dc.contributor.department	Τμήμα Βιοϊατρικών Επιστημών	el
dc.description.abstracttranslated	The management of harmful insects through RNA interference (RNAi) is a methodology with many perspectives, which is considered as safe for the environment and humans. An interesting approach is the delivery of specific dsRNA molecules, encapsulated in virus-like particles (VLPs), to target insects. RNA interference, directed by small interfering RNAs (siRNAs), is a dynamic antiviral mechanism against RNA and DNA viruses in many eukaryotic organisms. In particular, this mechanism initially recognizes dsRNA molecules of viral origin in the cytoplasm by the enzyme RNase-III Dicer-2 (Dcr2), converting them into siRNAs. In order to enable the production of dsRNAs at high levels, a recombinant nucleopolyhedrovirus AcMNPV was used. This virus expresses a fluorescent recombinant Flock House virus protein that acts as an RNAi inhibitor (B2-GFP) as well as a RNA hairpin targeting the luciferase gene (dsLuc). This strategy aims to bind many B2 molecules on the expressed dsLuc molecules, in order to avoid their fragmentation by Dicer-2. The present study was focused on the study of the subcellular distribution of B2, and therefore of the dsLuc hairpin, under the presence of fluorescent recombinant viral proteins (ODV, IE1, GP64, Ac93) in order to better evaluate dsRNA accumulation. Moreover, the viral levels were evaluated by genomic and protein analyses. In addition, a comparison of dsRNA expression levels was performed between infected and uninfected cells. When compared with the existing literature, the subcellular localization of viral proteins was shown to be identical, while the presence of B2 protein did not seem to affect the basic pattern of viral protein localization during infection. Finally, the mainly nuclear localization of B2-GFP protein as well as the increase of total dsRNA molecules in cells infected with AcMNPV-dsLuc/B2-GFP virus, indicate the possible increase of the desired dsRNA.	el

Files in this item

Name:: Prifti_62117042.pdf
Size:: 3.798Mb
Format:: PDF
Description:: Πτυχιακή Εργασία

View/Open

This item appears in the following Collection(s)

Πτυχιακές εργασίες
Πτυχιακές εργασίες τμήματος Βιοϊατρικών Επιστημών

Show simple item record

Except where otherwise noted, this item's license is described as
Αναφορά Δημιουργού - Μη Εμπορική Χρήση - Παρόμοια Διανομή 4.0 Διεθνές