Η αλληλεπίδραση της πρωτεΐνης GATA3 με το μονοπάτι NF-κB στον καρκίνο του μαστού

Θεάκου, Μαρία Παναγιώτα

The interaction of GATA3 protein with the NF-κB pathway in breast cancer

Πτυχιακή εργασία

Συγγραφέας

Θεάκου, Μαρία Παναγιώτα

Ημερομηνία

2022-10-07

Επιβλέπων

Παπαναστασίου, Αναστάσιος

Ερευνητική Πτυχιακή Εργασία στον Καρκίνο του Μαστού (5.828Mb)

Περίληψη

ΕΙΣΑΓΩΓΉ: Η πρωτεΐνη GATA3 έχει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη των αυλικών κυττάρων του μαζικού αδένα και στον ER-θετικό (Estrogen Receptor) καρκίνο μαστού. Το μονοπάτι NF-κB διαμεσολαβεί πληθώρα μοριακών και κυτταρικών λειτουργιών σε έναν μεγάλο αριθμό κυττάρων και ιστών. Σκοπός της παρούσας πτυχιακής εργασίας είναι η μελέτη της πιθανής λειτουργικής αλληλεπίδρασης της πρωτεΐνης GATA3 με συστατικά του μονοπατιού NF-κB. Για τον σκοπό αυτό αναλύθηκαν προηγούμενα ερευνητικά αποτελέσματα και εφαρμόστηκε η τεχνική της ανοσοκατακρήμνισης (Immunoprecipitation, IP) για την πρωτεΐνη TRAF2 σε κυτταρικές σειρές καρκινωμάτων μαστού. Παράλληλα έγινε ανοσοϊστοχημική μελέτη της έκφρασης των πρωτεϊνών GATA3 και RelB, TRAF2, ως συστατικά του μονοπατιού NF-κB, σε 10 περιστατικά καρκίνου του μαστού. ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ: Για τη διεξαγωγή της μελέτης, πραγματοποιήθηκε ανοσοκατακρήμνιση με ειδικό αντίσωμα έναντι της πρωτεΐνης TRAF2 σε εκχυλίσματα της κυτταρικής σειράς BT474 (ER+, PR+, HER2+) και ελέγχθηκε η φυσική αλληλεπίδραση με την πρωτεΐνη GATA3. Εν συνεχεία, χρησιμοποιήθηκαν 10 ιστοπαθολογικά δείγματα ασθενών με ER-θετικό καρκίνωμα μαστού. Με τη μέθοδο της ανοσοϊστοχημείας και χρήση των αντίστοιχων ειδικών αντισωμάτων, μελετήθηκε η έκφραση των πρωτεϊνών GATA3, RelB και TRAF2 σε τομές παραφίνης. Ακολούθησε η κατηγοριοποίησή τους ανάλογα με τον βαθμό έκφρασης της κάθε πρωτεΐνης και ανάλογα με τον εντοπισμό της στον πυρήνα ή το κυτταρόπλασμα. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ: Η ανάλυση των υπαρχόντων δεδομένων φασματομετρίας μάζας και η ανοσοκατακρήμνιση του TRAF2 κατέδειξαν την πιθανή ύπαρξη σε κυτταρικές σειρές καρκίνου μαστού της φυσικής αλληλεπίδρασης της πρωτεΐνης TRAF2 και GATA3. Τα δεδομένα αυτά δεν μπορούν να αποκλείσουν την παρουσία ενός μεγαλύτερου πρωτεϊνικού συμπλόκου το οποίο περιλαμβάνει και άλλες πρωτεΐνες, πέραν αυτών που αναγνωρίστηκαν. Εν συνεχεία, αναλύθηκε ανοσοϊστοχημικά η πιθανή λειτουργική αλληλεπίδραση της πρωτεΐνης GATA3 με συστατικά του μονοπατιού NF-κB (TRAF2, RelB) σε τομές ER-θετικού καρκίνου μαστού. Αναγνωρίσθηκε μια πιθανή αρνητική συσχέτιση της παρουσίας της πρωτεΐνης RelB με την πρωτεΐνη GATA3 στον καρκίνο του μαστού. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ: Σύμφωνα με τα αποτελέσματα και τις αναλύσεις των ήδη υπαρχόντων δεδομένων, η πρωτεΐνη TRAF2 φαίνεται να αλληλεπιδρά φυσικά με την πρωτεΐνη GATA3, αναδεικνύοντας μια πιθανή λειτουργική αλληλεπίδραση του GATA3 με το μονοπάτι NF-κB. Επίσης, σύμφωνα με τα ανοσοϊστοχημικά δεδομένα, παρατηρήθηκε αρνητική συσχέτιση της παρουσίας της πρωτεΐνης RelB με την πρωτεΐνη GATA3 στα δείγματα καρκίνου μαστού. Απαιτούνται περαιτέρω μελέτες και περισσότερα δείγματα ασθενών για την κατανόηση της σχέσης της πρωτεΐνης GATA3 με το μονοπάτι του NF-κB και την αξιοποίηση αυτών των αποτελεσμάτων στην πρόγνωση και κλινική εξέλιξη της νόσου.

Περίληψη

INTRODUCTION: GATA3 protein has an important role in mammary gland luminal cell development and ER-positive (Estrogen Receptor, ER) breast cancer. The NF-κB pathway mediates a multitude of molecular and cellular functions in a large number of cells and tissues. The aim of this thesis is to study the possible functional interaction of the GATA3 protein with components of the NF-κB pathway. For this purpose, previous research results were analyzed and the technique of IP (Immunoprecipitation, IP) was applied for TRAF2 protein in breast carcinoma cell lines. At the same time, an immunohistochemical study of the expression of the GATA3 protein and RelB, TRAF2 proteins, as components of the NF-κB pathway, was performed in 10 cases of breast cancer. MATERIALS AND METHODS: To conduct the study, it was performed immunoprecipitation with a specific antibody against the TRAF2 protein in BT474 (ER+, PR+, HER2+) cell line extracts and it was checked the physical interaction with the GATA3 protein. Subsequently, they were used 10 histopathological samples from patients with ER-positive breast carcinoma. With the method of immunohistochemistry and using the corresponding specific antibodies, it was studied the expression of GATA3, RelB and TRAF2 proteins in paraffin sections. This was followed by their categorization according to the grade of expression of each protein and according to its localization in the nucleus or the cytoplasm. RESULTS: Analysis of existing mass spectrometry data and immunoprecipitation of TRAF2 demonstrated the possibility of natural interaction of TRAF2 and GATA3 protein existence in breast cancer cell lines. These data cannot exclude the presence of a larger protein complex that includes other proteins besides those who identified. Afterwards, it was analyzed immunohistochemically the possible functional interaction of GATA3 protein with NF-κB pathway components (TRAF2, RelB) in ER-positive breast cancer sections. It was identified a rather negative correlation of the presence of RelB with GATA3 in breast cancer. CONCLUSIONS: According to the results and the analyzes of the existing data, TRAF2 protein seems to physically interact with GATA3 protein, highlighting a possible functional interaction of GATA3 with the NF-κB pathway. Also, according to the immunohistochemical data, it was observed a negative correlation of the RelB protein presence with the GATA3 in the breast cancer samples. Further studies and more patient samples are needed to understand the relationship of the GATA3 protein with the NF-κB pathway and to utilize these results in the prognosis and clinical progression of the disease.

Αριθμός σελίδων

Σχολή

Σχολή Επιστημών Υγείας & Πρόνοιας

Ακαδημαϊκό Τμήμα

Τμήμα Βιοϊατρικών Επιστημών

Γλώσσα

Ελληνικά

URI

https://polynoe.lib.uniwa.gr/xmlui/handle/11400/3075
http://dx.doi.org/10.26265/polynoe-2915

Συλλογή

Πτυχιακές εργασίες

Εμφάνιση πλήρους εγγραφής

Αναφορά Δημιουργού - Μη Εμπορική Χρήση - Παρόμοια Διανομή 4.0 Διεθνές

Εκτός από όπου επισημαίνεται κάτι διαφορετικό, το τεκμήριο διανέμεται με την ακόλουθη άδεια:
Αναφορά Δημιουργού - Μη Εμπορική Χρήση - Παρόμοια Διανομή 4.0 Διεθνές