Αξιολόγηση μοριακών και ανοσοχρωματογραφικών μεθόδων στη διάγνωση δερματοφυτικών λοιμώξεων

Γριβοκωστοπούλου, Μαρία

Evaluation of molecular and immunochromatographic methods for the diagnosis of dermatophyte infections

Πτυχιακή εργασία

Author

Γριβοκωστοπούλου, Μαρία

Date

2024-03-08

Advisor

Siopi, Maria

Πτυχιακή εργασία (2.841Mb)

Keywords

Δερματόφυτο ; PCR ; Ανοσοχρωματογραφία ; Διάγνωση ; Ονυχομυκητίαση

Abstract

Η άμεση μικροσκόπηση και η καλλιέργεια αποτελούν το χρυσό πρότυπο στη διάγνωση δερματοφυτικών λοιμώξεων, ωστόσο χαρακτηρίζονται από μειωμένη ειδικότητα και χαμηλή ευαισθησία σε συνδυασμό με αυξημένο χρόνο λήψης αποτελεσμάτων (έως 4 εβδομάδες), αντίστοιχα, καθυστερώντας την έγκαιρη έναρξη της ενδεδειγμένης αντιμυκητικής θεραπείας. Ως εκ τούτου, η εφαρμογή μη καλλιεργητικών μεθόδων αποτελεί ελκυστική εναλλακτική διαγνωστική προσέγγιση. Σκοπό της παρούσας μελέτης αποτέλεσε η αξιολόγηση δύο εμπορικά διαθέσιμων δοκιμασιών, μιας μοριακής (Dermatophyte PCR kit, PCR) και μιας ανοσοχρωματογραφικής (Diafactory tinea unguium, DTU), στην ανίχνευση δερματοφύτων. Μελετήθηκαν ξέσματα όνυχος από 84 άτομα με κλινική υποψία ονυχομυκητίασης με μικροσκοπία φθορισμού (Blankophor P), καλλιέργεια, PCR και DTU. Εκτιμήθηκε η κατηγορική συμφωνία μεταξύ της εκάστοτε υπό μελέτη δοκιμασίας και της μεθόδου αναφοράς (θετική [υφές ή/και αρθροκονίδια] άμεση μικροσκόπηση ή/και θετική για δερματόφυτο καλλιέργεια), καθώς και η διαγνωστική τους ακρίβεια. Περισσότερα δείγματα βρέθηκαν θετικά για δερματόφυτο με PCR (36%) και DTU (50%) παρά με καλλιέργεια (10%), ενώ η PCR ήταν θετική για T. rubrum σε δύο περιπτώσεις που απομονώθηκαν Candida spp. στην καλλιέργεια. Η συμφωνία μεταξύ της PCR ή της DTU και της μεθόδου αναφοράς ήταν 63% και 70%, αντίστοιχα. Η θετική προγνωστική αξία, η αρνητική προγνωστική αξία, η ειδικότητα και η ευαισθησία της PCR ήταν 96%, 45%, 96% και 49%, αντίστοιχα, ενώ της DTU ήταν 100%, 40%, 100% και 62%, αντίστοιχα. Η υψηλή ειδικότητα και θετική προγνωστική αξία, σε συγκερασμό με την ευκολία στη χρήση και την υψηλή ταχύτητα λήψης αποτελεσμάτων, καθιστούν τις PCR και DTU ως ελκυστικές επικουρικές δοκιμασίες για τη διερεύνηση της ονυχομυκητίασης στην καθ’ ημέρα εργαστηριακή πράξη.

Abstract

Direct microscopy and fungal culture are considered the gold standard for diagnosing dermatophyte infections, however they are characterized by reduced specificity and low sensitivity combined with long turnaround time (up to 4 weeks), respectively, delaying the timely initiation of appropriate antifungal therapy. Therefore, the implementation of nonculture-based methods consists an appealing alternative diagnostic approach. The aim of the present study was to assess the performance of two commercially available tests, a molecular (Dermatophyte PCRkit, PCR) and an immunochromatographic (Diafactory tinea unguium, DTU), for the detection of dermatophytes. Νail clippings from 84 patients with suspected onychomycosis were studied by fluorescence microscopy (Blankophor P), culture, PCR and DTU. Categorical agreement between each of the assays under evaluation and the reference method (positive [hyphae and/or arthroconidia] direct microscopy and/or positive for dermatophyte culture), as well as their diagnostic accuracy, was determined. More samples were positive for dermatophyte by PCR (36%) and DTU (50%) than by culture (10%), while T. rubrum was detected by PCR in two specimens which were culture-positive for Candida spp. The agreement between the PCR or the DTU and the reference method was 63% and 70%, respectively. The positive predictive value, negative predictive value, specificity and sensitivity of the PCR was 96%, 45%, 96% and 49%, respectively, while of the DTU was 100%, 40%, 100% and 62%, respectively. Based on the high specificity and positive predictive value, combined with the ease of use and the short time required to obtain results, PCR and DTU may be attractive adjunctive tools for the onychomycosis workup in everyday laboratory practice.